狗狗为什么感染球虫?
因为球虫是寄生虫的一种,而所有的动物都是球虫的宿主(寄主) 。所以人也有可能得球虫病哦~ 因为狗是食肉动物 所以吃进去的食物有可能携带有球虫卵囊 而狗又喜欢到处乱吃东西 比如地上的垃圾食物啊、粪便啊等。。。。所以很容易把带有球虫卵囊的东西吃掉 那么当狗的肠道内有了这个虫卵后 就会发育成为成虫 开始危害狗的健康
那什么是卵囊呢? 答:卵囊是球虫的孢囊状态,由卵囊膜和内含体两部分组成,球虫在宿主细胞外度过其生活方式的第一个阶段。成熟卵囊呈球形,直径约14~28微米,厚7.5~10微米。卵膜为两层膜结构,外层为囊壁层(wall layer),主要由膜蛋白构成;内层为内膜层(plasmalemma layer),由一层极薄的膜组成。内含体是指被包裹在内含液中的物质成分,包括类脂、核酸、多糖及一些酶原或酶制剂等。
一、犬球虫病的临床症状 答:潜伏期一般为3-6天,个别可短至1-2天,也可长达10天左右!发病初期病犬精神沉郁厌食,喜饮水但不吃东西;之后逐渐消瘦贫血,严重者可出现腹泻水样便,粪便中带血或含有粘液。部分患犬会出现便秘与腹泻交替的情况! 如果没有及时就诊治疗的话 有的狗狗可能会死亡
二、犬球虫病的诊断方法 一、粪便检查 ①涂片染色镜检法:取新鲜粪便标本涂片,干燥固定,吉姆萨或瑞特氏染色镜检观察有无球虫孢子囊和卵囊 二、病原培养 ②鸡胚培养法:将新鲜粪便用生理盐水稀释制成10%的鸡胚胎悬液,接种于9~10日龄鸡胚尿囊腔或卵黄囊中,孵育72h左右,收集鸡胚绒毛尿囊膜和卵黄膜刮取物涂片,镜检
三、组织学检查 ③病理切片检查:取肠道黏膜做石蜡切片,HE染色,光镜检查
四、血清生化指标检测 ④谷丙转氨酶(ALT)测定:对患有球虫感染的病犬采血,将血清用于ELISA检测球虫抗体和谷丙转氨酶水平,结果以U/L表示。 五、PCR技术 ①总DNA提取:取50μl粪便样品加到1mlTRIzol总RNA提取溶液中,震荡混匀,室温放置5min,然后加入200ul氯仿,轻轻颠倒混匀,室温放置5min,12000r/min离心15min,取上清液至另一无RNase试管中;向上述上清液中加入等体积异丙醇,置-20℃冰箱沉淀15min以上,12000r/min,4℃离心20min,弃上清液,留沉淀,用50μl的TE溶解,-20℃保存待用。 ②引物和探针的设计合成:参考Genbank中已发表的犬等几种动物球虫基因序列设计引物和探针,并由上海生物工程技术服务有限公司合成。引物序列为:5'-GTCAGACTGCGGATGTTGA-3', 5'-CGAGTGCCTAGCTTATTTCACG-3';探针序列为: 5'FAM- GCATCGCACCACAAGTCTA CGA TTT TT-BHQ1. ③反应体系配制:取2×MasterMix10μl,DNA模板3μl,上游引物1μl,下游引物1μl, 探针1μl, ddH2O补足至25μl。 ④PCR反应条件设置:94℃预变性5 min,然后94℃变性30 s,58℃退火1 min,72℃延伸2 min,共30个循环,最后72℃延伸10 min。 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,在紫外灯下拍照记录并定量扩增产物大小约为581bp。 ⑤结果判定:参照文献[8]采用半定量方法计算各样本PCR产物的平均光密度值,根据公式Dn=10-ΔOD值/β(其中Dn代表第n管的光密度值,△OD值为两孔差值)进行相对定量分析,结果见表1。
六、免疫荧光试验 ⑦染色的具体步骤如下:将玻片置温箱内烤4h后备用。脱蜡,水洗。10%羊血清室温封闭30min。加兔抗虫抗原多克隆抗体工作液,滴加于载玻片上,4℃过夜。洗去多余抗体,加FITC标记的山羊抗兔IgG,37℃孵育30min。洗去游离抗体,封固。
八、动物感染模型的建立 ⑧选用健康的4月龄杂种犬4只,体重(13±2)kg,雌雄各2只。随机分为两组,每组2只,分别命名为“实验组”和“对照组”。实验组和对照组的饲料相同。 ⑨实验前采集新鲜粪便作粪便检查,未检出球虫卵囊;接种前实验组用1g/L的碘对实验犬的肛门周围进行消毒处理,防止接种时造成感染;接种后观察记录实验犬的精神状况、粪便情况等变化情况。